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水质安全快检系列
LCHJ755 水质总大肠菌群(粪大肠菌群)快速测定纸片

产品编号:

规      格:1份/水样/包(15张纸片)

主要功能:

用      途:本产品适用于地表水、生活污水、医疗机构及禽畜养殖业等其他行业排放的废水中(粪)大肠菌群的快速筛查。

贮藏条件:0-4℃冰箱贮藏。

产品说明
 
 
LCHJ755水质总大肠菌群(粪大肠菌群)快速测定纸片
 
包装规格:1份/水样/包(15张纸片)
 

 型号

 规格/接种总量

适用范围 

 LCHJ755(A)  1/水样/包(接种总量:55.5ml)其中5份10ml水样,5份1ml水样,5份0.1ml水样 适用于地表水(湖水、水源水)中大肠菌群的快速检测;
 LCHJ755(B)  1/水样/包(接种总量:5.55ml其中5份1ml水样,5份0.1ml水样,5份0.01ml水样 适用于河水、生活用水、医疗机构处理后排污水、禽畜养殖业等排放废水中大肠菌群的快速检测。
  
1、适用范围 水质(粪)大肠菌群的测定 纸片快速法
 
本标准适用于地表水、生活污水、医疗机构及禽畜养殖业等其他行业排放的废水中(粪)大肠菌群的快速筛查。
本方法的检出限为20MPN/L。
 
2、术语和定义
下列术语和定义适用于本标准(HJ755-2015 水质总大肠菌群(粪大肠菌群)的测定纸片快速法)
 
2.1总大肠菌群(total coliforms)
在37℃培养,24h内能发酵乳糖酸产气的需氧及兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。
 
2.2 粪大肠菌群(fecal coliforms)
44.5℃培养,24h内能发酵乳糖产酸气的总大肠菌群,属粪行来源,称为粪大肠菌群。
 
3、方法原理
将一定量的乳糖、指示剂(溴甲酚紫和2,3, 5-氯化三苯基四氮唑即TTC)以及营养成分等吸附于一定面积的无菌滤纸上,当细菌生长繁殖时,产酸使PH值降低,溴甲酚紫指示剂由紫色变黄色。同时,产气过程相应的脱氢酶在适宜的PH范围内,催化底物脱氢还原TTC形成红色的不溶性三苯甲臜(TTF),即可在产酸后的黄色背景下显示出红色斑点(或红晕)。通过上述指示剂的颜色变化就可对是否产酸产气作出判断,从而确定是否有(粪)大肠菌群存在,再通过查MPN表就可得出相应(粪)大肠菌群的浓度值。
 
4、试剂和材料
除非另有说明,分析时均使用符合国家标准的分析纯化学试剂。
 
4.1市售水质总大肠菌群、粪大肠菌群测试片:10ml水样量纸片按附录A的方法进行质量鉴定,达到要求后方可使用。
 
4.2无菌水
用新制备的去离子水或蒸馏水,按无菌操作要求,121℃高压蒸汽灭菌20min,备用。
 
4.3硫代硫酸钠溶液:ρ(Na2S2O3)=0.10g/ml
称取硫代硫酸钠10g,溶于适量蒸馏水(或去离子)中,稀释至100ml,现配。
 
4.4乙二胺四乙酸二钠(EDTA- Na2)溶液:ρ(C10H14N2O8Na2。 2H2O)=0.15g/ml
称取EDTA-Na2 15g,溶于适量蒸馏水(或去离子水)中,稀释至100ml,此溶液保质期为30d。
 
5、仪器和设备
5.1 恒温培养箱:37℃±1℃。
5.2 恒温培养箱:44℃±0.5℃。
5.3 高压蒸汽灭菌器:121℃、101.3kpa。
5.4 冰箱:0-4℃
5.5 移液管:1±0.01ml、10±0.1ml。
5.6 试管:φ15mm×150mm.
5.7 采样瓶:500ml。
注1:移液器、试管、采样瓶等玻璃器皿实验前要按无菌操作要求包扎,121℃高压蒸汽灭菌20min,烘干,备用。
 
 
6、样品
用灭菌器具,按照HJ755-2015的规定及无菌操作的要求,采集水样400ml放入已灭菌的采样瓶中。如果是经加氯处理的废水,需在采样瓶灭菌前加入乙二胺四乙酸二钠(EDTA- Na2)溶液(5.4)1.2ml,以消除干扰。酸性样品,需调节胖胖的PH值至7.0-8.0。
采样后2h内检测,否则,需10℃以下冷藏并6h内送检,实验室接样后,应将样品放入0-4℃冰箱并2h内测定。
注2:10mg硫代硫酸钠可保证去除水样中1.5mg余氯,硫代硫酸钠用量克根据水样实际余氯量调整。
 
7、分析步骤
7.1接种量
每个样品按三个不同的接种量接种,每个接种量分别接种5张纸片,共接种15张纸片。
根据水样的污染程度确定接种量,应尽可能使5个接种量最大的纸片为阳性、5个接种量最小的纸片为阴性。
 
清洁水样的参考接种量分别为10 ml、1 ml、0.1 ml,受污染水样参考接种量根据污染程度可接种1 ml、0.1ml、0.01 ml或0.1 ml、0.01 ml、0.001 ml等。
 
接种量小于1ml时,水样应制成稀释样品后使用。接种量为0.1ml、0.01 ml时,分别制成1:10稀释样品、1:100稀释样品。其它接种量的稀释样品依次类推。
1:10稀释样品的制作方法为:吸取1ml水样,注入盛有9 ml无菌水的试管中,混匀,制成1:10稀释样品。其它稀释度的稀释样品同法制作。
 
7.2接种、培养
水样充分混匀,按无菌操作制作稀释水样及接种水样。
清洁水样,接种水样总量为55.5ml,10 ml水样量纸片5张,每张接种水样10ml,1 ml水样量纸片10张,其中5张各接种水样1ml,另5张各接种1:10的稀释水样1ml。受污染水样,接种3个不同稀释度的1ml稀释水样各5张。
接种水样应均匀涂布于纸片上,纸片充分侵润、吸收水样,用手轻轻压平,做好标记。
 
测总大肠菌群时,在37±1℃的条件下培养18-24h后观察结果;测粪大肠菌群时,在44.5±0.5℃的条件下培养18-24h后观察结果。
 
注3:
1、检测粪大肠菌群时,纸片接种后应立即放置于44.5±0.5℃的恒温培养箱中培养,在常温下放置过久将影响检测结果的准确性。
2、纸片加入水样后,短时间内变黄或退色,表明水样存在酸性物质活氧化剂干扰,需按“7样品”一节方法去除相应干扰。
 
9、结果判定
(1)纸片上出现红斑或红晕且周围变黄,为阳性。
(2)纸片全片变黄,无红斑或红晕,为阳性。
(3)纸片部分变黄,无红斑或红晕,为阴性。
(4)纸片的紫色背景上出现红斑或红晕,而周围不变黄,为阴性。
(5)纸片无变化,为阴性。

 

10、注意事项:

  1、 应避光低温(10℃以下)保存,并注意防潮,如发现纸片变为粉红色即为失效。

  2、 可疑结果的判断

  大肠菌群菌量的多少与结果的显示密切相关,可出现3种不同现象:(1) 菌量较大(≥103cfu/mL),整个纸片变黄而又无红色斑点(或红晕);(2) 菌量适中(102~103 cfu/mL),整个纸片也变黄,但有小而密集的红色斑点;(3) 菌量较少(≤102 cfu/mL),纸片可呈紫蓝色,并有散在或较密集的红色斑点,其周围变黄。因此菌量较大时,可能出现可疑现象。此时应通过加大样品稀释度或进一步做复发酵进行证实。其它可疑现象也可通过复发酵实验进行确认。

  3 ﹑ 确认试验的方法


  进行确认试验,用灭菌摄子无菌操作将可疑纸片移种到乳糖发酵管里,置37 ℃ 24小时培养后,对其产酸产气者判为大肠菌群阳性,否则判为阴性。

 

        

 

HJ755-2015水质总大肠菌群和粪大肠菌群的测定_纸片快速法

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